北京微光远航科技有限公司
qPCR荧光检测滤光片

QPCR荧光检测原理及滤光片选择

产品

  • qPCR荧光检测原理
  • qPCR(定量聚合酶链式反应),基本原理是通过在PCR反应中加入荧光探针或染料,动态监测核酸扩增反应过程中荧光信号的变化,从而实现对初始模板的实时定量分析。这一过程需要使用光学滤光片辅助进行荧光信号采集。普通的PCR只做扩增而不实时检测,不需要使用光学滤光片。
  • qPCR典型光路设计
  • 光路构成:光源(激光/LED/卤素灯) → 激发滤光片 → 二向色镜 → 样本 → 二向色镜 → 发射滤光片 → 探测器 (PMT/PD)。
  • 1. 侧射式光路(侧向激发、接收)
  • 2. 共聚焦光路(Confocal)
  • 3. 滤光片轮式光路(Filter Wheel)
  • 4. 多通带并行光路(多组滤光片配合多探测器)
  • 5. 光纤耦合光路(Fiber-coupled)
  • 光学滤光片类型以及在qPCR光路中的核心作用
  • 由于荧光信号非常微弱,来自样品池的散射光、试剂自发荧光、环境光干扰等杂散光会严重干扰荧光信号的采集,因此必须使用光学滤光片进行过滤提纯。滤光片是决定qPCR仪器灵敏度的关键元件,可以大幅提高信噪比,使仪器能识别微弱的荧光信号,从而显著提高检测灵敏度。
  • 1.激发滤光片:只允许透过特定的激发波长光信号
  • 2.二向色镜:反射激发光,同时透射荧光,通常45°倾斜使用。
  • 3.发射滤光片:只允许透过目标荧光信号,阻挡激发光与光路中的杂散光。
  • 4.多通带滤光片(MBP):多通带并行设计光路可以采用多组单一通道的滤光片组合并行排列,也可以直接选择单独的多通带激发和发射滤光片实现信号有效隔离,使得设计仪器结构紧凑。
  • qPCR 常用荧光通道及滤光片关键参数
  • 激发滤光片光谱类型通常是带通滤光片,发射滤光片光谱类型可以是带通滤光片,也可以是高陡度长波通截止滤光片。二向色镜是45°设计使用的干涉截止滤光片,光谱类型有长波通,短波通。
  • 不同的荧光检测通道对应不同的荧光染料或者荧光探针,每个通道对应一组激发、发射滤光片。例如 FAM/SYBR Green 激发:470nm 发射:520nm ；VIC/HEX/JOE 激发:530nm 发射:570nm；ROX 激发:580nm 发射:610nm ；Cy5/Texas Red 激发:620nm 发射:680nm等。
  • 荧光检测带通滤光片关键指标:中心波长CWL、透过率T%、半带宽FWHM、截止深度Blocking、截止范围、陡度等。这些关键参数的选择直接影响荧光信号检测灵敏度。北京微光远航科技可以根据客户需求定制各种光谱类型的荧光检测滤光片。

    • 了解详情qPCR荧光检测滤光片
  • 荧光滤光片测试光谱