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酶标仪检测原理
1.酶标仪遵从朗伯比尔定律,通过测量样品的吸光度值(Abs) 实现定量测量。吸光度值与样品浓度成正比,通过标准曲线可换算浓度。
2. 检测流程(吸光度模式)
a.光源:氙灯/卤素灯发出宽带复合光。
b.单色器:滤光片或光栅作为酶标仪的单色器将光源发出的宽带复合光改变为单色光,例如ELISA常用405nm、450nm、630nm。
c.样品吸收:单色光垂直穿过微孔板上的样品,被酶催化的有色产物吸收。
d.信号转换:光电二级管(PD)/光电倍增管(PMT)将透射光转换为电信号,再经放大、对数转换等处理。
e.计算输出:微处理器计算吸光度值Abs,并通过比对标准曲线给出样品浓度。
3. 扩展检测模式:a.荧光模式。b.化学发光模式。c.时间分辨荧光(TRF)模式。d.荧光偏振(FP)模式。
酶标仪 传统光路结构
1. 滤光片式光路( 传统)
结构:光源→滤光片轮(内置多片固定波长的酶标仪滤光片)→待测样品→PMT/PD检测器。
特点: 传统的滤光片式结构简单、经济适用、响应速度快、有效抑制了杂散光。适合固定波长 ELISA、常规比色检测。
典型配置:6-10 个滤光片孔位,标配 405/450/492/630nm,其他波长需要定制。
其他配置及检测场景: 核酸定量检测配置340nm等。蛋白定量检测配置405nm等。
2. 滤光片式光路(吸光度/荧光双模式)-吸光度模式同上所述,荧光模式光路结构设计如下:
a. 垂直激发–垂直检测光路(简单有效)。
b. 90° 正交光路(侧向激发/侧向检测)。
c.聚焦式光路(高端荧光/化学发光通用)
所需滤光片类型: a.激发滤光片(Excitation Filter) b.二向色镜(Dichroic Mirror) c.发射滤光片(Emission Filter)。
常规配置:FITC/荧光素:Ex485nm/Em535nm FAM:Ex495nm/Em520nm Cy3:Ex550nm/Em570nm Cy5:Ex640nm/Em670 nm。
3.光栅式光路(全波长扫描/多功能)
光路结构:光源→衍射光栅→样品→PMT/PD检测器。
特点:连续扫描波长(200-900nm),波长任意可调,适用于核酸/蛋白定量、连续光谱扫描等。光谱带宽可调(2-10nm)。
酶标仪滤光片选型步骤
a.适配机型:预先确认酶标仪内置滤光轮放置滤光片的孔位尺寸,选择适合对应机型的滤光片。
b.波长选择:吸光度:ELISA一般标配405nm、450nm、492nm、630nm; 其他检测项目对应不同波长的滤光片,可以选配。
c.荧光波长选择:FITC(485/535)、Cy3(550/570)、Cy5(640/670)。
北京微光远航科技有限公司可提供各种波长的标配/选配酶标仪滤光片,例如415nm,490nm,540nm,562nm,570nm,595nm,650nm等。尺寸可定制,包括Dia10mm,Dia12mm,Dia12.7mm,Dia15mm等。
了解详情酶标仪滤光片